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地化所建立基于生物傳感器的土壤重金屬檢測系列新方法

傳統(tǒng)重金屬檢測方法依賴大型儀器,需要復雜繁瑣的前處理過程、高昂的檢測成本和較長的檢測周期。同時,傳統(tǒng)檢測方法面臨著靈敏度不高和智能化程度低的問題。因此,亟需建立高靈敏度及智能化重金屬檢測方法,以彌補傳統(tǒng)方法的不足。生物傳感器是快速檢測方法,具有響應迅速、成本低、靈敏度高及便于攜帶等優(yōu)點,可以較好地克服傳統(tǒng)檢測方法的局限,在重金屬簡單、快速、高靈敏檢測方面頗具應用前景。

中國科學院地球化學研究所環(huán)境地球化學國家重點實驗室研究員劉承帥團隊與廣東省科學院生態(tài)環(huán)境與土壤研究所研究員陳俊華等,建立了以功能核酸為分子識別元件的重金屬生物傳感器,實現(xiàn)了對重金屬的超靈敏、智能化快速檢測,并構建了土壤有效態(tài)重金屬檢測新方法。

該團隊建立了dna網狀納米結構生物傳感器,實現(xiàn)了對土壤重金屬的超靈敏檢測??蒲腥藛T創(chuàng)新性地以雙莖環(huán)dna探針為自組裝元件。當反應體系存在待檢重金屬(以鈾離子為例),釋放的核酸片段可激活dna組裝,經過多重循環(huán)的核酸雜交及鏈置換反應,形成dna網狀納米結構的熒光生物傳感器。該熒光生物傳感器對鈾離子的檢測線性范圍為10 pm到1 mm,檢測限為2 pm,可實現(xiàn)對土壤樣品中痕量鈾污染的超靈敏檢測。該熒光生物傳感器操作簡單、響應迅速、信號擴增效率高效,為土壤重金屬的超靈敏檢測提供了新方法。

該研究建立了分子邏輯門生物傳感器,在分子水平上實現(xiàn)了重金屬的智能化檢測。研究以有效態(tài)鉛和有效態(tài)鎘兩種重金屬為目標物,基于二進制原理,以0和1對重金屬進行編碼,以功能核酸為重金屬分子識別元件,通過核酸并行運算和雜交反應,構建了多種分子邏輯門生物傳感器,包括or、and、xor、inhibit、半加器、半減器等。在生物傳感邏輯運算中,0表示檢測體系中不存在有效態(tài)鉛或鎘;1表示檢測體系中存在有效態(tài)鉛或鎘。以fam和cy5進行雙通道熒光標記,根據(jù)真值表排布,不同的重金屬組合會產生不同的熒光輸出信號,從而在分子水平上為重金屬的智能化檢測提供了一套新的傳感體系。

該工作建立了dna熒光生物傳感器,實現(xiàn)了對土壤有效態(tài)重金屬的免萃取、簡單、快速檢測。目前,土壤有效態(tài)重金屬檢測方法較多,如bcr法、maiz三步連續(xù)提取方法、tessier五步連續(xù)提取法、dtpa-cacl2法等,但適用條件等存在爭議。例如,強酸強堿等化學試劑介導的重金屬萃取難以反映土壤中有效態(tài)重金屬的真實含量。同時,這些方法需要連續(xù)多步的萃取分離過程,步驟繁瑣且耗時較長。因此,探索構建無需消解萃取且可真實反應土壤中有效態(tài)重金屬含量的快速檢測方法具有重要意義。

該團隊以生命體基元dna為有效態(tài)重金屬識別探針,通過dna識別、切割以及信號轉換,構建了dna熒光生物傳感器,實現(xiàn)了對土壤有效態(tài)重金屬(鉛、鎘、銅等)的快速檢測。該方法操作簡單、無需復雜的連續(xù)萃取過程,同時,dna探針混合即可檢測,響應迅速,方便現(xiàn)場快速分析。該熒光生物傳感器對有效態(tài)鉛的檢測靈敏度可達0.2 pm,用于土壤樣品有效態(tài)重金屬檢測時,與傳統(tǒng)dtpa-cacl2法相比,誤差小于10%,具有高靈敏度和高特異性,可滿足復雜樣品中有效態(tài)重金屬檢測需求。

相關研究成果分別發(fā)表在analytical chemistry、talanta和science of the total environment上。相關技術已申請發(fā)明專利。研究工作得到國家重點研發(fā)劃、國家自然科學基金和貴州省高水平人才項目等的支持。

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